过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚法）

一、实验原理

过氧化物酶（Peroxidase，POD）是一种氧化还原酶，主要存在于植物和真菌中。它能够催化过氧化物分解，产生氧气和双氧水，同时也能催化一些酚类物质氧化，生成醌类物质。这些物质可以与细胞内的蛋白质、多糖等物质结合，形成褐变产物，影响食品的品质和营养价值。过氧化物酶能够将愈创木酚氧化形成4-邻甲氧基苯酚。该产物呈红棕色，在470 nm处有最大光吸收，故可通比色法测定过氧化物酶的活性。

二、实验试剂

1.0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH7）。

2.反应液（100 ml 0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH6）中加入0.5 ml 愈创木酚、1 ml 30﹪H2O2，充分摇匀）。
三、实验步骤

1. 酶液提取
称取植物叶片1g，剪碎置于已冷冻过的研钵中，加入少量石英砂，分两次加入总量为10 mlpH7磷酸缓冲液，研磨成匀浆后，倒入离心管中，在8000 r / min离心15min，上清液即为粗酶提取液，倒入小试管低温下放置备用。

2. 酶活性测定
吸取反应液3 ml 于试管中，加入酶提取液0.02 ml，迅速摇匀后倒入光径1cm的比色杯中，以未加酶液之反应液为空白对照，在470nm波长处，以时间扫描方式，测定3min内吸光度值变化，取线性变化部分，计算每分钟吸光度变化值△A470。

3. 酶活性计算
按下式计算酶的相对活性