植物组织种丙二醛含量的测定

一、实验原理

丙二醛(MDA)是膜脂过氧化分解的最终产物之一，其含量可以反映膜脂过氧化的程度。同时，MDA在生物体内积累还会对细胞膜造成进一步的伤害，所以MDA的含量可以反映生物体衰老和遭受逆境伤害的程度。

植物组织中的MDA在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA)产生显色反应，反应产物为粉红色的3，5，5-三甲基噁哩2，4-二酮。该物质在532 nm波长下有吸收峰。由于硫代巴比妥酸也可与其他物质反应，并在该波长处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其他物质反应的影响。在丙二醛含量测定时，同时测定600 nm下 的吸光度，利用532 nm与600 nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。

二、实验试剂

1. 0.05 mol · L-1 pH 7.8磷酸钠缓冲液；石英砂；

2. 5% 三氯乙酸溶液：称取5 g三氯乙酸，先用少量蒸個水溶解，然后定容到100 mL；

3. 0.5% 硫代巴比妥酸溶液：称取0.5 g硫代巴比妥酸，用5%三氯乙酸溶解，定容至100 mL。

三、实验步骤

1. 丙二醛的提取：取5 g样品，加入2 mL预冷的0. 05 mol · L-1 pH 7.8的磷酸缓冲液，加入少量石英砂，在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆，转移到5 mL刻度离心试管中，将研钵用缓冲液洗净.清洗液移入离心管中，最后用缓冲液定容至5 mL。在4 500 r · m-1条件下离心10 min，上清液即为丙二醛提取液。

2. 丙二醛含量测定：吸取2 mL的提取液于刻度试管中，加入5% 硫代巴比妥酸溶液 3 mL,于沸水浴上加热10 min,迅速冷却。于4500 r · min-1离心10 min 取上清液于532、 600 nm波长下，以蒸憎水为空白调透光率100%，测定吸光度。

3 .结果计算：

式中以一吸光度；

V1 —反应液总体积，4 mL；

V一提取液总体积，5 mL；

V2一反应液中的提取液体积，2 mL；

W一植物样品重量，0.5 g；

1.55X10-1—丙二醛的微摩尔吸光系数（在1 L溶液中含有1 μmol 丙二醛时的吸光度）。