植物体内游离脯氨酸测定

一、实验原理

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。

二、实验试剂

1. 3%磺基水杨酸水溶液

2. 甲苯

3. 2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol/L磷酸以3︰2混合

4. 脯氨酸标准溶液：称取25mg脯氨酸，蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100μg/ml。再取此液10ml用蒸馏水稀释至100ml，即成10μg/ml的脯氨酸标准液

三、实验步骤

1．标准曲线制作
         各试管中试剂加入量

（1）取7支具塞刻度试管按表38-1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。

（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm下比色。

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。
2．样品测定

（1）脯氨酸提取  取不同处理的剪碎混匀叶片0.2～0.5g，分别置于大试管中，加入5ml 3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。

（2）取出试管待冷却至室温后，吸取上清液2ml，加2ml冰乙酸和3ml显色液，于沸水浴中加热40min，下一步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。

（3）结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。

    脯氨酸（μg/g FW）= (C*(V/a)) / W

    式中  C—提取液中脯氨酸浓度（μg），由标准曲线求得；

    V—提取液总体积（ml）；

    a—测定时所吸取的体积（ml）；

    W—样品重（g）。