茶氨酸含量测定

1.测定原理    

试样中的茶氨酸经沸水加热提取,净化处理后,利用分离强极性化合物的RP-18柱分离，用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,外标法定量。

2.样品制备   

茶叶样品经磨碎混匀后,称取1.0 g(准确至0.01 g)磨碎试样于200 mL烧杯中,加沸蒸馏水100 mL。置于100℃的恒温水浴锅中浸提30 min,过滤,转移到100 mL容量瓶中,冷却后,用水定容至刻度,混匀。取1 mL样品,在13 000 r/min条件下高速离心10 min,然后进液相色谱分析。

3.色谱条件     

色谱柱:RP-18柱,250mm×4.6 mm,5 um;检测波长:210 nm;柱温:35℃;进样量: 10 uL;流动相A:100%纯水，流动相A:100%乙腈 ;流速:1.0 mL/ min。洗脱梯度如下：

4.样品测定

标准储备溶液:精确称取茶氨酸标准品0.05g,用纯水溶解并转移至50 mL容量瓶中,定容至刻度，即为1mg/mL的标准储备液。   标准使用液:分别吸取茶氨酸标准储备溶液0mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL，用水定容至10mL，得到浓度分别为0mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL浓度的茶氨酸标准使用液。

待流速和柱温稳定后,准确吸取10 uL茶氨酸标准使用液注射入HPLC，在相同的色谱条件下注射10 uL测试液。测试液以峰面积定量。由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的茶氨酸的浓度。测试液中的茶氨酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。

茶氨酸标品色谱图

5.结果计算

试样中 γ-氨基丁酸含量按下式计算。w=C*V/m

式中：

w——试样中茶氨酸含量,单位为克/千克(g/ kg) ;    C——样液中茶氨酸测定浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);    V——定容体积,单位为毫升(mL);    m——试样质量,单位为克(g)。