靛酚蓝比色法测定植物铵态氮

一、测定原理

氮素作为植物生长发育所必须的基本营养元素，在植物生长发育和形态建成中起着重要作用，铵态氮可以被植物直接吸收利用。铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，在625nm处有特征吸收峰，吸光值与铵态氮含量成正比。

二、实验试剂

亚硝基铁氰化钠、氢氧化钠、磷酸氢二钠、次氯酸钠、硫酸铵

苯酚试剂

将0.05g亚硝基铁氰化钠溶解在500mL蒸馏水中，再加入11mL苯酚溶液或9.9g结晶苯酚，混合均匀后定容到1000mL。

次氯酸盐溶液

将5.0g氢氧化钠溶解在700mL的蒸馏水中，再加入20.1g磷酸氢二钠，中火加热并不断搅拌至完全溶解。冷却后加入14.7mL含8.5%活性氯的次氯酸钠溶液并混匀，定容到1000m。

标准铵溶液

称取0.6607g(NH4)2SO4溶于蒸馏水中，定容至100mL，配制成0.1mol/L的铵储备液。将上述储备液稀释配制成1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L五种不同浓度梯度的标准液。

三、试样提取

取样品1.0g，加入9mL的蒸馏水，经粉碎匀浆，12000g，4°C离心 10min，取上清液待测。

四、分析步骤

4.1标准曲线的制作

取6个50mL容量瓶，分别吸取铵储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，定容。配制成1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L五种不同浓度梯度的标准工作液。取6支试管，分别向每支试管中加入50μL标准工作液，空白为50μL蒸馏水；向每支试管中加入2.5mL的苯酚试剂，摇匀；再向每支试管中加入2mL次氯酸钠试剂，混匀；将混合液在95°C水浴中加热显色反应5min；冷却后，在625nm波长下比色。以吸光度和标准液浓度为坐标轴绘制标准曲线。

4.2试样溶液的测定

向每支试管中加入50μL经适当倍数稀释的试样溶液，空白为50μL蒸馏水。按标准曲线的检测步骤测定试样溶液的吸光度。样品的吸光度与标准曲线比较求出含量。

五、结果计算

试样中铵态氮含量计算：

w=C*V*18*f/m/1000

式中：

w——试样中铵态氮的含量，单位为克每千克（g/kg）；

C——由标准曲线求得试样溶液中铵态氮的浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L）；

 V——制备试样浸提液时水的体积，单位为毫升（mL）；

m——制备浸提液用试样质量，单位为克（g）；

 f——样品稀释倍数；

18——NH4+的分子质量；

1000——换算系数。