亚麻酸、亚油酸和油酸的测定

1、测定原理

试样加入石油醚后，利用超声辅助直接提取脂肪酸，紫外检测器测定，保留时间定性，峰面积外标法定量。

2、样品制备

适量，研碎，备用。

3、样品处理   

精密称取粉碎的试样约2g，加入石油醚(30~60℃)50ml,超声提取30min，过滤；向滤渣加入石油醚(30~60℃)50ml，再次超声提取30min,合并滤液，旋干，用四氢呋喃转移定容至10ml，滤液过0.22μm的微孔滤膜,取续滤液，即得供试品溶液。

4、样品测定

（1）色谱条件

色谱柱 Agilent TC-Cis（4.6mmx250mm,5μl)

流动相为：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0~ 8 min,60% A;8~12 min,60%→64% A;12~38 min, 64% A;38~45 min,64%→75% A;45~55 min,75%→ 78% A;55~60 min,78%→100% A;60~75 min,100% A);

检测波长：203nm;

流速：1.0ml/min;

进样量：5μl; 

柱温：25℃。

（2）标准系列溶液测定

精密称取亚麻酸标准品4.85mg，加四氢呋喃溶解定容至5mL，摇匀，备用。精密称取亚油酸标准品 18.05mg和油酸标准品6.67mg，置5ml容量瓶中，精密移取亚麻酸标准品溶液1.0ml，加四氢呋喃溶液定容，配制成1ml含亚麻酸0.097mg/mL、亚油酸1.805g/ mL、油酸0.667mg的混合标准品溶液。

按照设定的色谱工作条件,待仪器稳定后,依次测定系列标准工作溶液中亚麻酸、亚油酸、油酸的色谱峰面积。以系列标准工作溶液中亚麻酸、亚油酸、油酸的浓度为横坐标，以相应峰面积为纵坐标,绘制亚麻酸、亚油酸、油酸的浓度-色谱峰面积标准曲线。

（3）试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到峰面积。以保留时间定性，试样溶液中脂肪酸保留时间应与标准系列溶液中脂肪酸的保留时间一致。 将试样溶液测定的响应值(峰面积)进行定量。

5、结果计算   

试样中亚麻酸、亚油酸、油酸的含量以质量分数W计。

 W=C*V*f/m/10000

 式中:

 W——试样中亚麻酸、亚油酸、油酸的含量，g/100g；

 C——试样溶液中亚麻酸、亚油酸、油酸的浓度，mg/L；

 V ——试样提取溶液的总体积，mL；

 m ——试样质量，g；  

10000——换算系数； 

 f ——超出线性范围后，需要进一步稀释的倍数。