土壤酚酸测定

1. 试验材料

1.1仪器：高效液相色谱仪、台式pH计、超声波震荡仪、高速离心机。

 1.2试剂：酚酸标准品:香草酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸。乙腈、甲醇、冰醋酸为色谱级，盐酸、 氢氧化钠为分析纯。

2. 土样采集

采集土样后，采用抖土法收集各处理根际土壤，室内风干后过0.425 mm筛，用塑封袋装后于4℃保存待用。

3. 土壤酚酸提取 

称取土样10 g置于离心管中，加入NaOH溶液，超声震30 min后静置24 h，于210 r/min摇床上震荡30 min，8 000 g离心力下离心20 min，分离上清液后用盐酸调整溶液pH至2.5沉淀出胡敏酸，超声震荡10 min后静置2 h，8 000 g 离心力下离心10 min，分离上清液4℃保存待分析。

4. 标准溶液配制 

准确称取香草酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸各20.0 mg分别置于3个100 mL 容量瓶中，并准确称取香草酸、对羟基苯甲酸、 阿魏酸各20.0 mg置于同一容量瓶中，滴加几滴甲醇溶解后用超纯水定容至刻度线，作为单一标样以及混合标样的母液，于4℃中保存，使用时稀释100倍作为工作液。所有样品进样前经0.22 μm滤膜过滤。

5. 色谱条件

分离柱采用C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）， 检测波长为 λ=280 nm，柱温为35℃，进样量为20 μL，采用A、 B双泵系统，其中流动相组分A为乙腈，B为用色谱纯的冰醋酸调节pH 2.60的高纯水，双泵体积流量SI=0.8 mL/min， 调整两泵的流速来分离3种酚酸。

6.上机测定

在上述液相色谱参考条件下,将标准系列溶液、试样溶液注入高效液相色谱仪，以保留时间定性，以色谱峰面积外标法定量。标准溶液色谱图见下图。

1：对羟基苯甲酸；2：香草酸；3：阿魏酸

7. 结果计算

试样中酚酸的含量以质量分数w表示,单位为mg/g,按下式计算:

  酚酸含量W（mg/g）=C*V/M

式中:  

C—待测液中酚酸浓度,单位为毫克每升(mg/mL)；

V—样品提取液体积,单位为毫升(mL);

m —试样的质量,单位为克(g)。