辣椒素测定

1）测定原理 

粉碎或捣碎均匀的样品中的辣椒素类物质用甲醇- 四氢呋喃(1+1)混合溶剂经超声提取，然后用反相高效液相色谱-紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。 

2）仪器 

高效液相色谱仪、分析天平、烘箱、超声波清洗仪、离心机 

3）试剂 

水、甲醇（色谱纯）、四氢呋喃（色谱纯）、甲醇-四氢呋喃(1+1)混合溶剂、辣椒素标准物质(纯度≥95%)、二氢辣椒素标准物质(纯度≥90%) 

辣椒素类物质标准储备液：分别精确称取辣椒素标准物质0.0526g(精确到0.0001g)和二氢辣椒素标准物质0.0556g(精确到0.0001g)；用甲醇溶解并定容至50.0mL。配成浓度均为1mg/mL的辣椒素和二氢辣椒素的混合标准液，密封后贮于4℃冰箱中备用。 

辣椒素类物质标准使用液：分别吸取标准储备液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，用甲醇定容至25mL，此标准系列浓度为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、 80μg/mL、100μg/mL。 

4）测定步骤 

①样品处理 

称取适量样品，加入甲醇-四氢呋喃(1+1)混合溶剂，拧紧离心管盖，然后在60℃水浴条件下，使用超声波震荡器提取30min。离心，收集上清液，然后在滤渣中再加入甲醇-四氢呋喃(1+1)混合溶剂，使用超声波震荡器提取30 min，离心，收集上清液。将两次上清液合并待测，经0.22μm滤膜过滤后进行色谱分析。

②上机测试 

色谱柱：C18  4.6mm×250mm  5μm

流动相：甲醇＋水

进样量：10μL 

流速：1mL/min

紫外检测波长：280nm

柱温箱温度：30℃ 

5）测定结果计算 

①辣椒素：Wa=C1×V÷1000÷m 

②二氢辣椒素：Wb=C2×V÷1000÷m 

式中： 

Wa——试样中辣椒素的含量，g/kg； 

Wb——试样中辣椒素的含量，g/kg； 

V——样品定容体积，mL； 

C1——由标准曲线上查到的辣椒素含量，μg/mL； 

C2——由标准曲线上查到的二氢辣椒素含量； 

m——称样量，g。