平台简介
荧光定量PCR检测仪,是指通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监测反应过程的仪器。结合相应的软件可以对产物进行定性和定量分析,计算待测样品模板的初始浓度。在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。
最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,包括TaqMan荧光探针和SYBR荧光染料。PCR能对特定基因或种的丰度进行相对定量,比较不同处理或样品间的差异,如基因拷贝数、表达量来研究基因表达对处理的响应,同时可以获得PCR扩增效率等信息。
平台特点
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1、Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2、Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性最好的定量方法,已得到全世界的公认。
检测范围
广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。