氯仿熏蒸法测定土壤微生物生物量

氯仿熏蒸法，是指一种用于测定土壤微生物生物量的方法，是将土壤样品和氯仿装入干燥器中，通过真空抽气使气态氯仿在土壤孔隙中扩散，黑暗条件下培养，使氯仿与土壤充分接触，从而破坏土壤微生物的细胞膜结构，促进微生物细胞活性组分的释放，熏蒸后取出氯仿并通过反复真空抽气除去土壤中残留的氯仿。土壤样品经熏蒸后,全部活体微生物细胞破损,释放出微生物有机质。熏蒸对非活体土壤有机质无显著影响。土壤样品经氯仿熏蒸 24h后,对于熏蒸和未黑蒸的土壤样品,用0.5mol/L K2SO4溶液定量提取并测定。

一、仪器及设备

总有机碳分析仪、真空干燥箱、摇床。

二、实验试剂

无乙醇氯仿、硫酸钾溶液（0.5mol/L）
三、实验步骤

1.微生物量碳氮测定

称取新鲜土壤放入100mL烧杯中，放入干燥器中，干燥器底部放置几张用水湿润的滤纸，同时放入一个装有50mL NaOH溶液和一个装有约50mL无乙醇氯仿的小烧杯（同时加入少量抗暴沸的物质），用少量凡士林密封干燥器，用真空泵抽气至氯仿沸腾并保持至少2min。关闭干燥器漏阀门，在25℃的黑暗条件下放置24h。打开阀门，如果没有空气流动的声音，表示干燥器漏气，应重新称样进行熏蒸处理。当干燥器不漏气时，取出装有水和氯仿的玻璃瓶，氯仿倒回瓶中可重复使用。擦净干燥器底部，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。同时称同样量的土壤1份，不进行熏蒸处理，放入另一个真空干燥器中，作为对照。

熏蒸结束后，将土壤全部转移到250mL三角瓶中，加入40mL硫酸钾溶液，在振荡机上浸提30min过滤。对照处理，同上用硫酸钾溶液浸提，浸提液立即测定。

2.微生物量磷测定

称取新鲜土壤于大铝盒中。在抽气皿中放入盛有25ml无醇氯仿的小烧杯，小烧杯中放几张小纸片以便于观察沸腾。放入装土的大铝盒，连上抽气机，抽真空使氯仿沸腾5分钟，关紧活塞，关闭抽气机。包上黑布，置于阴暗处（25℃）熏蒸24小时。到时间后，取出小烧杯后反复抽真空2~3次（每次5分钟），排除氯仿。 另称取一批同等重量的土放入大塑料瓶中，不做熏蒸处理，同样包上黑布，置于阴暗处24小时。 

两批土样转移到离心管中。用注射器注入每瓶 50ml 0.5mol/L 碳酸氢钠溶液，盖紧瓶塞，振荡 30 分钟，离心 5 分钟后取出，用定量滤纸过滤到 150ml 大三角瓶中，取 10ml 滤液，加入1ml 330g/L硫酸溶液，放置4h，加入1.0g 硫酸钾和0.5ml 饱和硫酸镁溶液及少量防爆沸颗粒，加入 0.2ml 过氧化氢，置于油浴锅中消化30min，根据颜色深度，再加入适量过氧化氢溶液，继续加热浓缩至2-3ml，然后用去离子水洗出，定容至 25ml。取适量消化液，用钼锑抗比色法测定磷含量。
四、结果计算

1.微生物生物量碳（Bc）计算 

ω（C）=Ec×2.2 

式中：ω（C）－微生物生物量碳的质量分数，mg/Kg；   

Ec－熏蒸土样有机碳量与未熏蒸土样有机碳量之差，mg/Kg； 

2.2－校正系数。

2.微生物生物量氮（MBN）计算 

MBN=EN×1.85 

式中： MBN－微生物生物量氮的质量分数，mg/Kg； 

EN－熏蒸土样所浸提的全氮与未熏蒸土样之间的差值，mg/Kg； 

1.85－校正系数。 

3.微生物生物量磷（MBP）的计算

MBP=（熏蒸土壤磷含量-未熏蒸土壤磷含量）/0.4 

式中：MBP——微生物量磷含量； 

0.4——转换系数。