qPCR相对定量检测

一、qPCR相对定量服务简介

实时荧光定量PCR(qPCR)技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增强，每个循环收集一次荧光信号，然后通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测，得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模板的量。一般采用2-ΔΔCt法进行数据计算，每个样本做三个复孔。

相对定量是对待测样品进行某一或多个特定基因的检测并确定待测基因相对于内参基因，以及特定基因在实验组中相对于对照组的相对表达差异，相对定量在研究生理变化对基因表达水平的影响以及验证转录组测序的差异基因表达水平中最为常用。

二、qPCR相对定量实验流程

总RNA提取及质检 → 反转录 → 引物设计、合成及调试→ 荧光定量PCR实验（扩增曲线、溶解曲线）→ 数据分析与处理

三、qPCR相对定量送样要求

1、新鲜取样或保存完好的样品，组织样品用液氮速冻后保存于-80℃冰箱，细胞也可以在加入Trizol后保存于-80℃冰箱，细胞≥10^6，组织≥300mg，血液≥1ml；DNA或RNA体积≥20ul，浓度≥100ug/ul

2、目的基因信息（包括基因序列或Genbank accession number、物种来源、目的基因丰度、特殊处理等）

3、送样时使用干冰，以保证运输过程中的低温条件（干冰的挥发消耗量约为4-5公斤/天，天气炎热时适当增加）